内分泌性阳痿需要做什么实验室检查

内分泌性阳痿需要做什么实验室检查【原理】

免疫珠是以共价键结合了兔抗人免疫球蛋白抗体的聚丙烯酰胺珠。由活动精子与交联珠间的连接判断精子表面存在由精子抗体及相应的免疫球蛋白类型。当精子在免疫珠悬液中游动时，那些表面有抗体的精子粘附到免疫珠上。因此，可以测定表面包有抗体的精子比例。间接IBT是现时公认检测体液标本抗精子抗体最为敏感而特异的方法。

内分泌性阳痿需要做什么实验室检查【试剂】

（1）正常供者精子，采自新鲜射出精液，精子上应无抗精子抗体包被，存活率为70%以上，活动度a、b级精子应为70%以上。

（2）免疫珠：羊抗人IgG、IgA（BioRad公司）。

（3）缓冲液Tyrode溶液（g/L）：

CaCl20.2

NaCl8.0

KCl0.2

NaHCO31.0

NaH2PO40.05

葡萄糖1.0

MgCl2·6H2O0.2

用前需用0.22μm滤器过滤除菌。

（4）BSA溶液：0.4%w/v（以Tyrode溶液配制）。

内分泌性阳痿需要做什么实验室检查【方法】

（1）直接法：检测去精浆精子表面附着的免疫球蛋白。

1）2个离心管中分别加入抗IgG和抗IgA免疫珠0.2mL、用0.4%BSA缓冲液稀释至10mL。

2）在另一支离心管中加入0.2mL精液，并且用0.4%BSA溶液稀释成1mL。

3）将3支离心管离心500×g5min，弃去上清，将免疫珠重悬在10mL0.4%BSA溶液中。

4）如步骤3）再次洗涤精液后，将沉淀的精子重悬于0.2mL0.4%BSA溶液。

5）在载玻片的两端分别加5μLIgG和IgA免疫珠。

6）再加5μL精液悬液到免疫珠上，用盖玻片边缘充分混匀，分别在两滴混合液上盖上一张盖玻片。

7）湿盒静置15min。

8）用400×的相差或普通光学显微镜观察，分别记录含有抗IgG和IgA免疫珠的混合物中粘有免疫珠的活动精子百分率%。

（2）间接法：检查血清或精浆中抗精子抗体。

1）将正常供者精子用0.4%BSA溶液如直接法中所述洗涤2次，同时如直接法准备免疫珠悬液。

2）将上述洗涤过的精子，用Tyrode氏溶液调整精子浓度至50×106/mL。

3）将50μL经过洗涤的精子加到50μL待检血清或精浆中，于37℃孵育1h。

4）如直接法步骤，将精子洗2次，再如直接法5）至8）步骤进行测定。

内分泌性阳痿需要做什么实验室检查【结果判定】

两种方法的结果判定均为：≥10%活动精子粘有免疫珠，结果为（+）。

注意：温度对精子活动影响很大，实验过程应保持室温在22℃左右。