血红蛋白浓度测定方法_血红蛋白有哪些结构组成的

一、血红蛋白五种测定方法

　　1、氰化高铁血红蛋白法（HiCN）：

　　1966年被ICSH推荐为参考方法。该法操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。其致命的弱点是*（KCN）试剂有剧毒，使用管理不当可造成公害。

　　2、十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法（SDS）：

　　该法操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害等优点。但由于摩尔消光系数尚未最后确认，不能直接用吸光度计算Hb浓度，而且SDS试剂本身质量差异较大会影响检测结果。

　　3、叠氮高铁血红蛋白（HiN 3）法：

　　该法优点与HiCN测定法相似医学|教育网|搜集整理、最大吸收峰在542nm、显色快、结果稳定、试剂毒性仅为HiCN测定法的1/7，但仍存在公害问题。

　　4、碱羟血红蛋白（AHD 575）测定法：

　　该法试剂简单、呈色稳定、无公害、吸收峰在575nm、可用氯化血红素作为标准品。但仪器多采用540nm左右滤光板，限制了此法使用。

　　5、溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法：

　　该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，适用于仪器上自动检测Hb和白细胞。缺点是测定结果的准确度和精密度不佳。

二、血红蛋白的组成结构

　　血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质。也是红细胞中唯一一种非膜蛋白。人体内的血红蛋白由四个亚基构成。人在不同的发育阶段血红蛋白亚基的种类是不同的。成人体内主要血红蛋白为两个α亚基和两个β亚基组成，在与人体环境相似的电解质溶液中血红蛋白的四个亚基可以自动组装成α2β2的形态。血红蛋白的每个亚基由一条肽链和一个血红素分子构成，肽链在生理条件下会盘绕折叠成球形，把血红素分子抱在里面，这条肽链盘绕成的球形结构又被称为珠蛋白。血红素分子是一个具有卟啉结构的小分子，在卟啉分子中心，由卟啉中四个吡咯环上的氮原子与一个亚铁离子配位结合，珠蛋白肽链中第8位的一个组氨酸残基中的吲哚侧链上的氮原子从卟啉分子平面的上方与亚铁离子配位结合，当血红蛋白不与氧结合的时候，有一个水分子从卟啉环下方与亚铁离子配位结合，而当血红蛋白载氧的时候，就由氧分子顶替水的位置。

三、血红蛋白的种类

　　从胚胎到成人血红蛋白的种类也在发生演变。构成血红蛋白的珠蛋白是由两对多肽链组成的，即α多肽链（114个氨基酸组成）及非多肽链（自146个氨基酸组成），分别命名为β、δ、γ及ξ链）。胚胎早期，即胚胎8周内主要合成三种胚胎型血红蛋白旦白，分别为Hb GowerI（ξ2ξ2），HbGower II（ α2ξ2）及Hb Portland （ξ2γ2）。至胚胎17周这3种血红蛋白渐渐消失，并为大量胎儿血红蛋白HbF（α2γ2）和2种少量的成人型血红蛋白即HbA（α2β2），HbA2（α2δ2）取代。胎儿6个月时HbF约占90%，HbAHK5-10%，以后HbA合成增加，HbF合成减少。出生时HbF约占70%，HbA约占30%，HbA<1%，生后HbF迅速为HbA代替，1岁时HbF不超过5%.若2岁以后HbF超过2%、HbA2超过6%就有临床意义医学教，育网|搜集整理。了解人类血红蛋白的演变过程，对某些遗传性溶血性贫血的诊断有一定的意义，如β型地中海贫血，HbF升高是诊断的主要依据。

四、血红蛋白注意事项

　　HicN是目前血红蛋白各种测定法中最准确的方法，除Hbs、HbC外其他血红

　　蛋白均可转化成HiCN，本文介绍试剂为国际血液学标准化委员会(ICSH)所推荐。由于HiCN的毫摩尔吸光系数得到国际公认，故可用经严格校准的高级分光光度计根据吸光系数直接计算，此种计算并非检验科常规方法。其计算公式如下：

　　表示540nm测得吸光度，251为血液稀释倍数，11.0为Hb分子单体毫摩尔吸光系数，1.0是光径，16114.5是单体分子量，除1000即由毫克(mg)换算为克(g)。

　　稀释液应贮存于棕色玻璃瓶中，不得贮存于塑料瓶中，否则氰离子吸附于塑料瓶壁，使测定结果偏低。

　　稀释液含*，切勿用口吸液。测定后废液应加入等量水稀释，并按每升加次氯酸钠溶液35ml，混匀，敞开容器，放置一夜后排入下水道。

　　血红蛋白测定尚有多种方法，目前所报道的方法均未建立本身的标准物，采用此类方法务请慎重，须以HiCN法为参考法进行评价后方可使用。尤须注意现在市售血红蛋白质控液均为HiCN法质控液，用于其他方法会有明显偏倚。