抗体检测

特异性抗体检测的目的首先是协助临床诊断，在某些疾病中亦是观察疗效及预后的一个指标，预防接种效果的观察，以及传染病流行病学调查中，特异性抗体的检测也具有特殊的、重要的意义。抗体检测注意事项有哪些?什么时候做抗体检查好?什么是封闭抗体检查?抗原或抗体检测的方法有哪些?下面就为大家带来详细的介绍。

抗体检测注意事项

问题为了保证试验的特异性和敏感性，无论是颗粒性抗原、组织提取物、多肽抗原、重组抗原都必须纯化，否则容易产生非特异性反应。在应用标记免疫分析中，可引起本底数值的增高，极大地影响试验的准确性。在检测自身抗体时，许多抗原是用组织提取物，更应注意抗原的纯化问题。由于不同组织、器官间可存在相同抗原成分，使得同一自身免疫病，可检出几种不同自身抗体，同一自身抗体又可出现在不同自身免疫病中，这就影响了检验的特异性。因此提示我们，关于这方面特异性抗原的提取、纯化和合成，还有许多工作要做，是一项任重道远的任务。还必须指出，无论检测哪一种抗体，所用抗原的片段或成分的不同，都可影响其特异性及敏感性。因此采用一种新抗原时，需要进行严格对照，方可确定其应用价值。必须明确，不同的检测方法，灵敏度、准确性、重复性并不完全相同，加上试剂盒质量不一，都影响到试验结果。在应用或建立一个方法时，检测系统中所有成分的浓度必须经过严格滴定，选择最恰当的浓度范围。例如酶联免疫吸附试验(ELISA)，抗原及酶结合物浓度低，最后吸光度值太小，易出现假阴性，如浓度太高，吸光度值偏大，甚至移到标准曲线的平台，即处于不敏感的范围便会明显影响结果的可靠性。抗体有保护性抗体，非保护性抗体之分，有些抗体的水平达到高峰后旋即下降乃至消失，有些抗体可长期存在直至终身。如乙肝核心抗体(抗-HBc)，阳性率可高达70%左右，临床医生常因此产生困惑。其实这是抗-HBc的总抗体，可能长期存在。如其滴度低，即为既往感染过乙肝，有流行病学意义，高滴度才有临床诊断意义。再如自身抗体测定中，少数正常人也存在有少量自身抗体，它不仅对机体无害，而且能帮助机体清除衰老及变质的细胞对机体有利。另外，在临床诊断中，须针对不同发病机理检测相应抗体，如I型超敏反应应检测IgE，而在Ⅱ型超敏反应主要测IgG、IgM型抗体，又如鼻咽癌患者查的是EB病毒壳膜抗原-IgA(IgA/VCA抗体)。另外抗体测定和其他检验一样，存在着假阳性、假阴性的问题，可能由于方法学的不完善引起，或者由于机体反应性的不同所致，在解释结果时务必注意。

什么时候做抗体检查好

什么时候做抗体检查好?抗精子抗体是导致免疫性不油腻出现的根本原因，因此当出现不孕不育的时候，有必要做一下抗体的检查却东是否因为抗精子抗体的关系才导致不怀孕，不孕不育专家指出检查抗精子抗体的时间是有讲究的，因此患者不要错过了。

抗精子抗体的产生是一个非常复杂的情况，同时抗精子抗体也是一个病例产物，在男性和女性身上都可以发生，对于女性来说男性的精子和精液都属于特异性抗原，一旦精子精液接触到女性的血液，那么就可以产生相应的抗体。

抗精子抗体的存在当精子和卵子的结合造成了困难，从而引起女性出现免疫性不孕，临床研究发现出现，一般女性是不会产生呢给康及逆转抗体的，但是如果女性之前患有阴道炎，输卵管炎，宫颈炎等生殖系统的炎症，那么发生免疫性不孕的几率就会大大的增加。

因为抗精子抗体男女性都可以患上，因此在检查的时候夫妻双方都应该单独用的检查，对于女性来说检查的时间最好定在月经干净后的三到五天，而男性朋友在检查的时候是没有时间限制的，随时都可以检查，因此患者朋友们一定要自己掌握好时间。

另外对于女性检查局部的抗体，宫颈粘液的检查是不能缺少的一个环节，因为男性的抗体当中会有局部的抗体存在，它对于女性的生育影响也是非常大的，因此女性朋友一旦患上免疫性不孕，就需要积极的到医院过检查，不要拖延检查的时间。

通过上面的介绍可以知道免疫性不孕当中抗体的检查时间是有规定的，尤其是女性一定要选择在月经干净后的三到五天，女性朋友千万不要忽视了，不孕不育专家指出免疫性不孕的发病原理非常复杂，因此只有经过详细的检查才可以最终诊断出病情，紧张治疗，因此患者要配合医生做好检查。

什么是封闭抗体检查

如果封闭抗体缺乏，就会导致流产。封闭抗体即抗丈夫淋巴细胞抗体(APLA)，如果APLA阴性，则需要进行免疫治疗。费用不是很多。 为保证患者的治疗效果和安全，接受治疗者应具备以下条件：

1、封闭抗体检测为阴性;

2、夫妻双方染色体正常;

3、夫妻双方ABO和Rh血型检查明确;

4、夫妻双方乙肝表面抗体，丙肝，梅素和HIV抗体以及TORCH检测正常

;确认无病毒等微生物感染; 5、夫妻双方肝，肾功能正常;

6、妻子内分泌无异常，免疫球蛋白和甲状腺功能正常;

7、妻子生殖道及其他妇科检查正常;

8、夫妻双方身体健康，无免疫性疾病等。

注意：

1，治疗应在医生统一计划下进行。

2，早孕后出现阴道出血等其他先兆流产情况，应及时与医生联系，以便及时保胎。

3，建议早孕后要配合安胎治疗。

4，免疫治疗期间出现不适，要及时联系医生。多数患者首次治疗出现红，硬结等现象，为正常免疫反应，随治疗次数增多会逐渐减弱。 祝您身体健康!

抗原或抗体检测的方法

由于各种检测方法中所用的抗原性状不同，出现结果的现象也不同。最广泛应用方法有下述几种：

(一)沉淀反应

可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应(precipitation neaction)。

1.环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于0.5cm的小试管底部。将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上，让抗原与抗体在两液体的界面相遇，形成白色免疫复合物沉淀环，故名为环状沉淀试验(ring precipitationtest),此法简便易行，需用材料较多是其缺点。

2.单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验(single immunodiffusion)是在凝胶中进行的沉淀反应。将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。当复合物体积增加到一定程度时停止扩散，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。本方法简便，易于观察结果，可测定抗原的灵敏度(最低浓度)约为10～20μg/ml，常用于定量测定人或动物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺点是需1～2天才能看结果

3.免疫比浊法 当抗体浓度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不见的小免疫复合物，它可使通过液体的光束发生散射，随着加入抗原增多，形成的免疫复合物也增多，光散射现象也相应加强。免疫比浊法(immunonephelomytry)就是在一定的抗体浓度下，加入一定体积的样品，经过一段时间，用光散射浊度计(nephelometry)测量反应液体的浊度，来推算样品中的抗原含量。本法敏感、快速简便，可取代单向扩散法定量测定免疫球蛋白的浓度。

4，双向免疫扩散试验 双免疫扩散试验(double immunodiffusion)是在琼脂板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现2～3条沉淀线，本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析

5.对流免疫电泳对流电泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫扩散。将琼脂板放入电泳槽内，使琼脂板的两孔沿着电场的方向，于负极侧的孔内加入抗原，于正极侧的孔内加入抗体，通电后，抗原带负电荷向正极泳动，抗体分子虽也带负电荷，但因分子量大，向正极的位移小，而受琼脂中电渗作用向负极移动，抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。只需1小时左右即可观察结果。

6.免疫电泳 免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法分成两个步骤，即先进行电泳，再进行琼脂扩散。先将样品加入琼脂中电泳，将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形� �，于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液，让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散，可形成多答卷沉淀线。常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义

抗原或抗体检测的原理

借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。

1.抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。

2.抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。

对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。

(1)根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原(或抗体)的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体(或抗原)的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原(或抗体)量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原(或抗体)的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。

(2)抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工作中，把浓度低的反应成分(抗原或抗体)的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比较3只家兔产生抗体的多少，即滴定3只兔血清抗体效价，可用双向琼脂扩散法来滴定，例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度(如甲兔的抗体效价为1/2000，而丙免的是1/8000则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高)。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。因人血清(抗原)和抗体(免疫兔血清)相比，浓度高，故应稀释抗原。