菌种如何保存

临床微生物实验室经常能够分离到一些有意义的菌种，但接种在平板上的细菌放4℃冰箱只能保存数天，并且细菌在培养基上移种3次后，其形态、菌落、毒力等均易发生变异，监测日常工作的室内质控用标准菌株也需要长期留存。所以尽可能长期有效地留存菌种对于系统地分析当前流行株的生物学、分子生物学特征及耐药性变迁，医院感染病原学调查、新药临床研究都十分重要的意义。本文介绍几种常用的菌种保存方法，如下：

菌种如何保存

一、常规保存法

该法操作简单，只需普通冰箱保存，每个临床微生物实验室均可采用。但缺点是留存时间短，传代频繁，菌种易变异。

二、半固体穿刺保存法

用穿刺接种法将细菌培养物接种于半固体培养基内，经 37℃18-24h培养后，加一层无菌的液体石蜡，厚度约为 1cm，置冰箱保存。肠道杆菌及葡萄球菌等，一般可保存3-6个月。当需传代移种时，将半固体菌种管倾斜使液体石蜡流至一边，再取菌移种于新的培养基。将沾有少量液体石蜡的接种环浸于 95%酒精中片刻，再烧灼灭菌以免直接在酒精灯上烧灼时，液体石蜡四处溅散而引起污染。如保存副溶血性弧菌可加入NaCl制成3.5%高盐半固体，在室温下可保存 1个月。

三、斜面保存法

⑴普通琼脂斜面保存法：葡萄球菌、肠道杆菌等对营养要求不高的一股细菌可接种于普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无糖肉膏液，以防干涸 (但变形杆菌"OX"及伤寒杆"O"菌株宜接种于干燥的琼脂斜面以防变异)。用橡皮塞塞紧，经37℃18-24h培养后，存放于 4℃冰箱中，一般可保存3-6个月。

⑵血液琼脂斜面保存法：链球菌及肺炎球菌等对营养要求较高的细菌应接种于血液琼脂斜面上，37℃培养生长后，放4℃冰箱保存。链球菌须半个月至1个月移种一次，肺炎球菌则须 4d移种一次。

⑶鸡蛋斜面保存法：将细菌接种于鸡蛋斜面上，经 37℃18-24h培养后，加无菌液体石蜡至斜面浸液，再超出约1cm，置4℃冰箱保存。此法用于保存含有Vi抗原的沙门氏菌及其它含表面抗原的细菌，可保存3-6个月。

⑷吕氏血清斜面：白喉棒状杆菌可保存在该培养基上，其成份为 1 %葡萄糖肉汤 (pH7.4) 1份，无菌牛血清或兔血清3份。白喉棒状杆菌在此培养基上生长迅速、旺盛，菌体形态典型，如在培养基中再加入5%-10%的中性甘油，则培养出的白喉棒状杆菌异染颗粒更为明显，单24小时后即衰老成为多形态，很少有异染颗粒，菌体粗大3-4倍� ��置4℃可保存2周至1个月。

四、砂土管保存法

适用于产芽孢的细菌

将过筛后的中性细砂烘干，装入小试管内约lcm高，塞以棉塞，灭菌烘干备用。用无菌生理盐水洗下培养基上的细菌培养物，制成菌悬液。然后吸此菌悬液约0.5ml注入砂土管内，以砂土全部浸湿为度。塞好棉塞，放入干燥器内抽干。然后放在装有氯化钙(吸水剂)的干燥瓶内，置冰箱保存备用。需用时可取一接种环砂土接种于适宜培养基上培养即可。

五、低温冷冻保存法

实验室必须配备-20℃以下低温冰箱，冰箱温度越低，保存的时间越长。

六、滤纸片低温冷冻保存菌种方法

将新华滤纸片剪成3mm×3mm，经高压蒸汽灭菌置无菌器皿中备用，0.5ml无菌带盖塑料离心管。将待保存菌种在血平板上分离纯化后，用无菌小镊子夹住滤纸片，在平板上刮取多量细菌，放在塑料离心管内，1只离心管中可放数十片带菌滤纸片，然后盖上盖子，用胶布将盖口封严，注明患者姓名，菌名及保存日期等以备查找。将塑料管放在-70℃冰箱内保存。使用时将菌种分别从塑料离心管中取出1片，放入增菌肉汤中,35℃孵育18～24h，再将菌悬液移种于血平板上。本方法适于保存对营养要求不高的细菌，而不适于苛养菌的保存。

七、湿牛奶冷冻法

材料①保护剂牛奶的准备：新鲜牛奶经脱脂棉反复 3次过滤后，10磅10min高压蒸气灭菌后，冰箱保存备用。②菌种管的处理：先经清洁液浸泡1天，之后用清水冲洗，再用蒸馏水浸泡过夜，以达中性，然后管口塞上棉花，经15磅30min高压蒸气灭菌备用。

方法将各种细菌种于各自生长良好的平板培养基上，经分纯后在37℃孵箱孵育18h后，用准备好的保护剂牛奶洗下菌苔，然后用无菌毛细滴管吸取菌悬液滴入菌种管球部，每管球部约有一半的菌液，之后火焰封口，保存于-20℃冰箱。抵抗强的细菌至少可保存3年，抵抗力弱的细菌保存不低2年。

八、细菌鉴定卡保存菌种

本法适用于使用VITEK全自动微生鉴定仪的实验室。方法是将鉴定卡标注后直接放置-20℃冰箱保存，复苏时将鉴定卡直接从-20℃移至35℃，待小孔液体完全融化后，以无菌手续，用注射器抽吸出阳性生长孔内的液体，点种于合适平板，置35℃孵箱内24～48小时即可。该法生化卡内的细菌反复冻融 5次，分离出的细菌效果相同。葡萄球菌属、肠杆菌属、念珠菌属存活时间不小于29个月;肠球菌属、黄杆菌属、不动杆菌属存活时间不小于21个月,链球菌属和假单胞菌属存活时间不小于10个月。

九、商品化菌种保存管

每只保藏管中含20-25个小珠以及缓冲液，使用时将菌落挑入缓冲液中，混匀，将缓冲液吸去，置-70℃冰箱保存可达10年，-20℃冰箱可保存1-3年。复苏时，只需将小珠接入肉汤或平板上滚动即可。商品化菌种保存管操作简单，但价格偏高。笔者预计随着经济的不断发展和实验室条件的改善，使用的单位将会越来越多。

十、冷冻真空干燥保存法

该法是目前 保存菌种的最佳方法，具有如下几个突出的优点：①适用范围广。除少数不产生孢子只产生菌丝体的丝状真菌不宜采用此方法保藏外，其他各大类微生物如细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及病毒均可采用此方法保藏;②保藏期长，成活率高。有人报道保藏在真空冷冻干燥安培管中的真菌成活期长达40多年，一般微生物至少可保存10余年;③微生物在保藏期内可避免其它杂菌污染;④便于携带运输，易实现商品化生产。其缺点为需要一定的设备(冷冻真空干燥机)、操作繁琐等。菌种管由传统的玻璃菌种管改为0.5ml带盖塑料离心管。方法：①将塑料离心管置耐高压塑料离心管盒内并用双层报纸包好，高压蒸汽15磅15min消毒，放烤箱80℃烤干。②在净化工作台内将脱脂牛奶洗下的浓厚菌悬液用长毛细玻璃滴管加到塑料离心管的底部，每只0.2ml左右，切记不要将牛奶污染离心管口。③将加好菌液的离心管盒置-20℃冰箱预冻，预冻好后把离心管盒放置到冷冻干燥机干燥箱内冻干。④冻干后在净化工作台内压好离心管盖，不抽真空。贴标签，用封口膜封离心管口。放-20℃冰箱保存。

临床微生物实验室可以根据本室的条件，挑选最适合的菌种保存法，也可以加以改良，其原则是除了菌种存活外，还必须保证其生物学性状不发生改变。

自制酸奶要选对菌种

家庭制作酸奶最好用酸奶机。因为它可以提供稳定的温度，保证旺盛繁殖的一定是目标乳酸菌，而不是其他的杂菌。酸奶机的温度是40~42℃，正好是制作酸奶所用的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的最佳繁殖温度。多数致病菌的适合繁殖温度是20~37℃，它们不喜欢40℃以上的高温。如果温度差异较大，则有可能造成杂菌的繁殖增加，安全性下降。

用菌粉或市售酸奶来做菌种均可。用菌粉时，加入的是冷冻干燥的菌种，它们在温暖环境中能够苏醒过来发挥作用。用市售酸奶时，一定要注意买最新出厂的冷藏酸奶。因为随着储藏时间的延长和储藏温度的上升，其中活菌数会不断下降，影响制作酸奶时的效果。一定要注意，那些常温下销售的酸奶不能做种，因为它们无法提供活菌，不能保证制作酸奶的安全性。

酸奶制作的基本要求是有足够多的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，所以买两种基本菌的菌粉即可。其他的保健菌，如嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、某些乳酪乳杆菌的菌株等，研究证明它们如果能够定植在人体大肠中的话，的确对健康有益。不过，如果保证这些菌发挥作用，那么前提是发酵后能够有足够的活菌数。

可是，这些菌的最适发酵条件不一定和前面说的这两种基本菌一样。特别是双歧杆菌，它们属于严格厌氧菌。所以，一般家庭的酸奶制作过程很难得到活的双歧杆菌。因此，不必对菌种中的保健菌期待太高。

一般来说，作为菌种的市售酸奶加入量在10%左右比较合适。比如说，发酵5 00克牛奶，用50克(小杯酸奶半杯)就可以了。这样的量，是为了让乳酸菌一开始就建立绝对的数量优势，能有足够的能力压制各种其他杂菌，即便是经验不足的人，也能保证酸奶制作成功。

如果用购买来的菌种自己做酸奶，可以再用来做菌种发酵两三次，如果用市场上的酸奶做种，最多可以再用一两次。想增加使用次数、降低制作成本，前提是做酸奶的操作足够规范，同时还要保证用来做种的自制酸奶质量足够高。

在用上一次的酸奶做菌种的时候需要注意，酸奶的味道必须纯正，而且要足够新鲜。味道纯正表明没有污染太多其他杂菌。发酵适度、及时冷藏、没有久存的酸奶中菌的活力还比较高。如果发酵过久，或者做好后没有及时冷藏，或冷藏时间太久，则酸奶中的活乳酸菌数量就会下降。假如发觉酸奶的味道有了酒味，或者有轻微的霉味，那就说明已经污染了大量杂菌，坚决不能再用了。

做酸奶之前，假如不是用刚从灭菌利乐包里倒出来的奶，最好把原料奶加热一下，加热到60~80℃，不沸腾但是可以杀灭大部分细菌，然后再降到40℃，再接种。做酸奶的盒子和加菌种的勺子等也要用沸水烫一下，或者在做酸奶的杯子、盒子里放一勺水，在微波炉里转一下，用热蒸汽杀掉上面的微生物，尽量减少杂菌的污染机会。

引起细菌性食物中毒的菌种有哪些

引起细菌性食物中毒的菌种主要有以下六种：

1.肠炎孤菌食物中毒。吃了被肠炎孤菌污染的鱼或贝类后，会引起食物中毒。可在食用后5-24小时内发病，在10小时后发病为最多，一般在3天内能治愈。

2.沙门氏菌属食物中毒。带菌的鸟、猪肉、鸡蛋等，未经煮烧，吃后容易引起食物中毒。吃后10-24小时内发病，一般在1周内能治愈。

3.致病性大肠杆菌食物中毒。大肠菌中约有20来种菌种可以引起食物中毒，一般发病后4-5日内症状可好转。

4.产气荚膜杆菌食物中毒。受产气荚膜杆菌污染的肉、鱼、贝类等食品，虽经煮烧，但放置数小时后食用的话，也容易引起食物中毒。

5.葡萄球菌食物中毒。食用了被葡萄球菌污染的牛奶、白脱、奶酪、盒饭后，3小时左右发病。

6.肉毒杆菌食物中毒。潜伏期平均1-2天，重病者可导致死亡。

你最喜爱的食用菌菌种有哪些

香菇，蘑菇，木耳都是生活中常见的食用菌，也是我们最喜欢吃的三种食用菌。那你对这三种食用菌了解多少呢?来看看小编的介绍吧。

食用菌大多性味甘平，具有补养之功，对人体有良好的保健作用。食用菌除含有水分、碳水化合物、蛋白质及微量的钙、磷、铁外，尚含有一些生物活性物质。食用菌的补养之功有一个突出的特点，那就是对大脑有良� �的补益作用。

1、香菇

香菇能增进食欲，促进发育，增强记忆，对促进儿童智力的发育和延缓老人智力的衰退有着特殊的功能。香菇含有蛋白质、氨基酸、脂肪、粗纤维、B族维生素、维生素C、烟酸、钙、磷、铁等成分。其中蛋白质含量在菌类食物中最高，人体必需氨基酸就有7种。还含有香菇素、胆碱、亚油酸、香菇多糖及30多种酶。这些营养成分对脑功能的正常发挥有重要的促进作用。

香菇芹菜炒墨鱼：取香菇12克用水泡开，洗净、切丝;芹菜300克，去根、叶，洗净，切段;墨鱼肉100克，洗净，切丝。在锅内加水100毫升，烧开后加料酒30毫升，然后把墨鱼丝放入锅中煮一分钟，捞出备用。将锅烧热，放入熟猪油，烧至七成热时，放入芹菜翻炒三四分钟，再加入香菇丝和墨鱼丝继续翻炒2分钟，撒上精盐和味精，即可食用。

2、蘑菇

蘑菇味鲜美，能增进食欲，调养胃气。鲜蘑菇水煎或做菜，可辅助治疗急慢性肝炎;蘑菇炖汤可缓解咳嗽气逆症状。蘑菇还具有加强机体结构活性的能力。若体虚者食用，可增强人体的免疫功能。

蘑菇炖豆腐：取嫩豆腐250克，洗净，切小块;鲜蘑菇100克，洗净，切片。把蘑菇和豆腐放入沙锅内，加精盐和清水，以浸没豆腐为宜，中火煮沸后，再小火炖约15分钟，加入酱油、味精，淋上芝麻油即可。

3、黑木耳

黑木耳所含的磷脂主要是脑磷脂、卵磷脂、鞘磷脂、麦角甾醇，这对脑神经的生长发育有良好的滋养作用。黑木耳是高蛋白、低脂肪食物，久服可以健脑益智，久病体虚、腰膝酸软、肢体麻木、失眠多梦、眩晕、健忘者可经常食用。

猪脑炖木耳：取猪脑250克，黑木耳10克，浸发，洗净。把鲜猪脑轻轻放入冷水中漂洗30分钟，去掉血筋膜，洗净� �把猪脑放入碗内，加入葡萄酒 10毫升，猪肉汤30毫升，精盐及葱、姜少许，蒸10分钟后取出。然后，在锅内加入油烧至七成热时，加入适量葱、姜煸炒几下，放入黑木耳翻炒2分钟，倒入葡萄酒10毫升，翻炒几下，再倒入鸡汤30毫升和少量清水，烧开后，放入猪脑和盐，小火炖20分钟，盛起倒入大碗中，加上味精及芝麻油。味道鲜嫩滑脆，功能滋补健脑，适合用脑过度者保养进补。

香菇芹菜炒墨鱼、蘑菇炖豆腐、猪脑炖木耳这三款菜肴，那一款是你喜欢的呢?那不妨试试小编的食谱，或许你做出的菜味道更鲜美呢!

食用菌菌种制作方法

我们大家可能吃过各种各样的食用菌，食用菌对我们的身体非常有益，经常食用对人体非常有益，但是很多人对食用菌菌种制作不熟悉，下面我们就具体来了解一下食用菌菌种制作的方法。

制作方法：

首先需要掌握食用菌菌种的生产技术。可以引进母种。也可以自己通过组织分离，孢子分离等方式选育驯化优良品种。得到纯菌种后，再通过转接试管扩大母种。母种长好后，转接原种，原种长好后再转接栽培种。有的品种需要使用原种直接进行栽培。例如杏鲍菇，白灵菇，金针菇等。有的需要转接栽培种进行栽培。例如平菇，鸡腿菇，姬菇等。

准备培养料及配方，以栽培100m2计算，需备优质干麦秸1500kg，干牛马粪600kg，磷肥50kg，尿素15kg，石膏粉25kg，碳酸钙12.5kg。 二、培养料的堆制与翻堆

(一)堆制培养料的全过程需要25天左右，建堆时间在播种前期5天进行。 (二)堆制与翻堆。培养成料堆制选在地平、不存水、无污染、有水源的地方;建堆前2-3天，将麦秸浸水后捞出，逐层均匀撒入1.5石灰粉，再将麦秸堆成长方形大堆，逐层踏实，同时将马粪土预湿;建堆时先在堆料场上铺一层湿好的麦秸，厚薄15-20cm，然后再在麦秸上撒一层粪，共计10-12层，从第二层开始适量加水，分四次进行翻堆，第一次在建堆后的第七天进行，以后每次间隔5-6天，每次翻堆严格按技术要求进行。

(三)播种时间：外界温度在25℃左右，料温在28℃以下适合播种，根据我市气温状况9月5目前为宜。

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(四)播种后覆土前的管理

(五)播种后，相对湿度保持在80%左右，如料温超过28℃，棚内温度超过30℃，适当通风降温。播种后4-10天内，要及时微量通风，如湿度在70%左右，属于偏低，可用纸盖在料面上，再用1%的石灰水喷在纸上，至纸湿而不积水为止。

(六)播种10日后及时把纸拿掉，15-20天后菌丝基本长满料层时即可覆土。 、覆土及覆土后的管理 覆土：按100m2计算需2.5m3土，在土中拌入50kg磷肥，1-2石灰粉，用水渗透，抓起成团，撒下散开为宜，把土均匀地铺在料面上，厚度在2-2.5cm为宜。

(七)适时采收：采收直径2-4cm。 专家预计，今年我省食用菌价格会继续上涨，但平 菇会逐渐被姬菇、秀珍菇、白灵菇取代，这主要是因为平菇的品质在下降，价格可能略有下降。而一些口感好、营养价值高的食用菌如杏鲍菇、姬菇、秀珍菇、白灵菇、茶树菇则会大受消费者欢迎，比2005年的销量肯定会翻一番，尤其是双孢菇的市场占有量会大幅度增加，种植珍稀食用菌定会有一个好收成

以上内容为我们介绍了食用菌菌种制作的方式方法，其实食用菌的制作方法非常简单，我们可以根据个人口味自己进行制作，从而满足我们个人的口味，使我们的身体更加健康。